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飲用水中銅綠假單胞菌的污染、控制及檢驗

發(fā)布時(shí)間：2022-07-04      瀏覽次數：4347    分享：

我們經(jīng)?？匆?jiàn)這樣的報道，某某飲用水廠(chǎng)商的一批飲用水中被查出銅綠假單胞菌超標，飲用水呈綠色，網(wǎng)友們紛紛調侃，水都不能喝了，該怎么生存？那么銅綠假單胞菌到底是什么？它是如何進(jìn)入到飲用水中的？我們該如何預防這種細菌的侵害？

銅綠假單胞菌

銅綠假單胞菌( P.Aeruginosa )

一種重要的水源性致病菌，廣泛存在于各類(lèi)型水中，對消毒劑、干燥、紫外線(xiàn)等理化因素及不良環(huán)境具有很強的抵抗力；作為條件致病菌，可能引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病。因此，監測分析其污染原因并進(jìn)行有效控制顯得尤為重要。

1 銅綠假單胞菌如何進(jìn)入飲用水中的？


銅綠假單胞菌如何進(jìn)入飲用水中的？

瓶（桶）裝水中銅綠假單胞菌的污染主要原因有水源受到污染，或現有的較為簡(jiǎn)單的水生產(chǎn)加工工藝；或生產(chǎn)過(guò)程中衛生控制不嚴格，從業(yè)人員未經(jīng)消毒的手直接與礦泉水或容器內壁接觸；或包裝材料未進(jìn)行徹底清洗消毒。

2 檢驗


檢查食品（飲用水）中的銅綠假單胞菌成為食品抽檢必不可少的檢測項目，以檢測飲用水為例列舉銅綠假單胞菌的檢測方法（GB 8538-2016 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法）：

一、檢驗流程：

銅綠假單胞菌檢驗流程

二、操作步驟：

1，水樣過(guò)濾

在100級的潔凈工作臺進(jìn)行過(guò)濾操作。首先用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器,將250mL水樣或稀釋液通過(guò)孔徑0.45μm的濾膜過(guò)濾,然后將過(guò)濾后的濾膜貼在已制備好的CN瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養基之間夾留著(zhù)氣泡。

2，培養

將平板倒置于36℃士1 C培養24 h~48 h,并防止干燥。

3，結果觀(guān)察

在培養20 h~24 h和40 h~48 h后觀(guān)察濾膜上菌落的生長(cháng)情況并計數。

計數所有顯藍色或綠色(綠膿色素)疑似銅綠假單胞菌的菌落，并進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗。

在紫外線(xiàn)下檢查濾膜時(shí),應避免長(cháng)時(shí)間在紫外光下照射,否則可能會(huì )將平板上的菌落殺滅,而導致無(wú)法在證實(shí)培養基上生長(cháng)。計數濾膜上所有發(fā)熒光不產(chǎn)綠膿色素疑似銅綠假單胞菌菌落,并進(jìn)行乙酰胺肉湯確證性試驗。

將其他所有紅褐色不發(fā)熒光的菌落進(jìn)行氧化酶測試、乙酰胺液體培養基、金氏B培養基確證性試驗,培養20 h~24 h觀(guān)察結果,防止因為培養40 h~48 h導致菌落過(guò)分生長(cháng)而出現菌落融合。

在CN瓊脂上生長(cháng)的菌落選擇和驗證步驟見(jiàn)表31。

CN瓊脂上生長(cháng)的菌落選擇和驗證步驟

三、生化鑒定

1、若CN板上是藍綠色（如下圖）疑似銅綠假單胞菌的菌落,需進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗

CN板上是藍綠色疑似銅綠假單胞菌的菌落

綠膿菌素試驗：取可疑菌落2個(gè)~3個(gè),分別接種在綠膿菌素測定培養基上,置36℃±1℃培養24h±2h,加入三氯甲烷3mL~5mL,充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷液內,待三氯甲烷提取液呈藍色時(shí),用吸管將三氯甲烷移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL左右,振蕩后,靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時(shí)為陽(yáng)性,表示被檢物中有綠膿菌素存在。

1.1綠膿菌素測定培養基中加入三氯甲烷后的顏色（如下圖）

綠膿菌素測定培養基中加入三氯甲烷后的顏色

1.2用吸管將三氯甲烷移到另一試管內加入鹽酸，振蕩，靜置（如下圖）

用吸管將三氯甲烷移到另一試管內加入鹽酸，振蕩，靜置

1.3藍色菌落呈粉紅色，綠色菌落呈淡粉色，有綠膿菌素存在。

2、若CN板上有熒光（如下圖）

按照GB85538-2016標準，產(chǎn)熒光（非藍綠）要進(jìn)行產(chǎn)氨實(shí)驗。

產(chǎn)熒光（非藍綠）

2.1將產(chǎn)熒光的菌落的純培養物接種到乙酰胺肉湯中36℃培養24h，加入鈉氏試劑（如下圖）。

將產(chǎn)熒光的菌落的純培養物接種到乙酰胺肉湯中36℃培養24h，加入鈉氏試劑

3、若CN板上是紅褐色

按照GB85538-2016標準，紅褐色菌落要進(jìn)行產(chǎn)氨試驗、氧化酶試驗。金氏B產(chǎn)熒光試驗。

鑒于本人經(jīng)驗有限，接觸樣品不多，買(mǎi)的標準菌株也是綠色形態(tài)（前面那株藍色菌落也是樣品中發(fā)現的，甚是寶貴）。所以，至今未見(jiàn)過(guò)紅褐色菌落，若有同行有檢出或者見(jiàn)過(guò)，還望交流，多加學(xué)習。

3.1標準菌株形態(tài)（如下圖）

標準菌株形態(tài)

3.2產(chǎn)氨實(shí)驗（同上，略）

3.3氧化酶試驗（如下圖）

氧化酶試驗

3.4金氏B產(chǎn)熒光試驗（如下圖）

金氏B產(chǎn)熒光試驗

4、其他

其他非前面三種，則判斷不是銅綠假單胞菌。

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