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無(wú)菌操作
進(jìn)行培養時(shí)，動(dòng)作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機會(huì )。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過(guò)早暴露在空氣中。同樣，培養液在未用前，不要過(guò)早開(kāi)瓶;用過(guò)之后如不再重復使用，應立即封閉瓶口直立可增加落菌機會(huì )。吸取營(yíng)養液、PBS、細胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或導致細胞交叉污染。工作中不能面向操作野講話(huà)或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺面及雙手。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過(guò)開(kāi)放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管丟掉。
培養前準備
在開(kāi)始實(shí)驗前要制定好實(shí)驗計劃和操作程序。有關(guān)數據的計算要事先做好。根據實(shí)驗要求，準備各種所需實(shí)驗器材和物品、清點(diǎn)無(wú)誤后將其放置操作場(chǎng)所(培養室、超凈臺)內，然后開(kāi)始消毒。這可以避免開(kāi)始實(shí)驗后.囚物品不全往返拿取而增加污染機會(huì )。
操作野消毒
無(wú)菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次(拖布要專(zhuān)用).紫外線(xiàn)照射消毒30-50min，超凈工作臺臺面每次實(shí)驗前要用75%酒精擦洗。然后紫外線(xiàn)淌毒30min。在工作臺面消毒時(shí)切勿將培養細胞和培養用液同時(shí)照射紫外線(xiàn)，消毒時(shí)工作臺面上用品不要過(guò)多或重疊放置.否則會(huì )遮擋射線(xiàn)降低消毒效果?！┎僮饔镁呷缫埔浩?、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內同時(shí)紫外線(xiàn)消毒。
體外培養細胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養成功或失敗的首要條件。即便使用設備完善的實(shí)驗室。若實(shí)驗者粗心大意，技術(shù)操作不規范,也會(huì )導致污染。因而.為在一切操作中為最大可能的保證無(wú)菌.每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。
洗手和著(zhù)裝
原則上和外科手術(shù)相同。平時(shí)僅做觀(guān)察不做培養操作時(shí)，可穿裝細胞培養室內紫外線(xiàn)照射30min的清潔工作服。在利用超凈臺工作時(shí)，因整個(gè)前臂要伸入箱內，應著(zhù)長(cháng)袖的清潔工作服，并于開(kāi)始操作前要用75%酒精消毒手。如果實(shí)驗過(guò)程中手觸及可能污染的物品和出入培養室都要重新用消毒液洗手。進(jìn)入原代培養室需徹底洗手還要戴口罩、著(zhù)消毒衣帽。
火焰消毒
在無(wú)菌環(huán)境進(jìn)行培養或做其它無(wú)菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過(guò)長(cháng)，以防退火，燒過(guò)的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過(guò)營(yíng)養液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營(yíng)養液能燒焦形成炭膜，再用時(shí)會(huì )把有害物帶入營(yíng)養液中。開(kāi)啟、關(guān)閉長(cháng)有細胞的培養瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過(guò)高燒死細胞。另外膠塞過(guò)火焰時(shí)也不能時(shí)間長(cháng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養細胞。
